導讀：本綜述總結了武漢大學中南醫(yī)院發(fā)表的一篇關于人臍帶間充質(zhì)干細胞治療乙型肝炎相關失代償性肝硬化的臨床研究成果。證實了干細胞對治療乙肝相關肝硬化失代償期患者具有較大潛力，可以在短時間內(nèi)改善肝功能，尤其是能夠極大提高患者凝血功能，且安全性良好。

近年來，干細胞移植技術在乙肝治療領域展現(xiàn)出巨大潛力，正逐漸成為一項充滿希望的治療策略。與胚胎干細胞相比，間充質(zhì)干細胞的使用避免了倫理爭議，同時降低了潛在的致瘤風險。

由于間充質(zhì)干細胞具有低免疫原性、自我更新能力、多向分化潛力以及分泌多種細胞因子的能力，使得它們在促進肝組織修復和再生方面具有獨特優(yōu)勢。間充質(zhì)干細胞移植也成為了一種極具吸引力的治療選擇。

此外，該方法不涉及任何倫理問題，為乙肝患者提供了一種安全且有效的治療新途徑。

多項臨床研究表明，干細胞治療能夠顯著改善乙肝患者的臨床癥狀，如乏力、腹脹、食欲不振、腹水等癥狀，并且在實驗室檢查中顯示肝功能和生化指標的改善。

武漢大學中南醫(yī)院：干細胞療法能夠改善乙肝患者肝功能并且顯著提高凝血功能！

2024年1月24日，武漢大學中南醫(yī)院在《Research Promotion》上發(fā)表了一篇人臍帶間充質(zhì)干細胞治療乙型肝炎相關失代償性肝硬化的研究:單中心、限內(nèi)、分階段研究的長期隨訪分析的臨床研究成果。^【1】

背景：我國存在大量失代償性肝硬化患者，主要由乙肝病毒（HBV）感染引起，患者經(jīng)歷了一個不可逆的肝硬化過程。臍帶間充質(zhì)干細胞（UC-MSCs）具有自我更新和多向分化的潛能，為治療失代償性肝硬化提供了可能。

方法：本研究為一項開放性、分級、單中心研究，共招募了所有39名患者，其中15名不符合我們的標準。擬招募24例自愿入組之乙肝肝硬化失代償期患者，分為3組：

1. 低劑量組，輸注100mL，每組2.5×10⁷個細胞；
2. 中劑量組，輸注100mL，每組5.0×10⁷個細胞；
3. 高劑量組，輸注100mL，每組1.0×10⁸個細胞，每組8例。

此后，研究人員還每6個月通過電話或診所安排一次生存隨訪，持續(xù)1.5年，但治療結束后低劑量組中的1名和中劑量組中的2名患者消失未完成隨訪。 （見圖1）

干細胞移植注射方法

輸注按照以下步驟進行：

1. 檢查：檢查人臍帶間充質(zhì)干細胞袋包裝外觀無滲漏、破損，標簽完整清晰。
2. 混勻：用腕力搖晃hUC-MSCs袋10次，使細胞充分混勻（因細胞懸液中含有人血白蛋白，弱力搖晃后細胞懸液增加泡沫屬正?，F(xiàn)象）。
3. 建立靜脈通路：建立通暢的靜脈通路，用0.9%氯化鈉溶液充分沖洗管路。
4. 靜脈滴注：
   • 低劑量組：靜脈注射人臍帶間充質(zhì)干細胞（100mL），含2.5×10⁷個干細胞，共注射3次（分別為第1天、第8天、第15天），間隔7天。
   • 中劑量組：人臍帶間充質(zhì)干細胞制劑100mL，含5.0×10⁷個干細胞，靜脈輸注間隔7天，分別于第1天、第8天、第15天，共3次。
   • 高劑量組：人臍帶間充質(zhì)干細胞（100mL），含1.0×10⁸個干細胞，靜脈注射3次（分別為第1、8、15天），間隔7天。

結果

此臨床試驗的主要目的是研究患者輸注人臍帶間充質(zhì)干細胞后的生存率、肝功能的改善、健康狀況的改善以及安全性和耐受性。

1.生存率評估：

• 低劑量組6個月存活率為75%(8例中的6例)。1例受試者在第7次隨訪(第85天)因新診斷出肝癌而退出隨訪。1例受試者在第7次隨訪后錯過隨訪，至今無法聯(lián)系。還有2例受試者死亡。1例死于創(chuàng)傷引起的腦出血(首次輸注后23個月)，1例死于肝性腦病(首次輸注后11個月)。我們的結論是這2例死亡與人臍帶間充質(zhì)干細胞制備無關。
• 中劑量組6個月存活率為75%（8例中的6例）。有一名參與者錯過了所有的隨訪，我們無法聯(lián)系到他/她。還有一名參與者由于COVID-19疫情（導致其所在城市長期宵禁）無法到醫(yī)院就診，但我們能夠聯(lián)系到他/她并確認他/她還活著。
• 高劑量組6個月生存率為100%（8/8）。2年隨訪尚未完成，最后一名參與者于2021年12月接受了第一次輸注，并將于2023年12月完成生存隨訪。

采用Kaplan-Meier生存分析研究三組患者的生存情況，如（圖2）所示，低、中、高劑量組患者的生存率無明顯差異（logrank=0.1741，P=0.9166），推測輸注較高濃度的人臍帶間充質(zhì)干細胞可能不會增加患者生命風險。

2.肝功能評估：

• 低劑量組和高劑量組血清白蛋白水平在第29天（P=0.0156、0.0156）和第57天（P = 0.0156、0.0078）顯著升高，在第85天3組均升高（P=0.0156，P=0.0313，P=0.0313）（圖3A）?。
• 此外，在整個訪視時間內(nèi)，這3組之間的Alb變化（與基線水平相比）沒有統(tǒng)計學差異。這些可能表明輸注不同劑量的人臍帶間充質(zhì)干細胞不會影響血清白蛋白水平。
• 第29天高劑量組CHE水平顯著升高，第85天低劑量組CHE水平升高。隨著時間的推移，CHE水平與基線相比沒有差異。這些指標推斷人臍帶間充質(zhì)干細胞不會對肝細胞造成損害。

3.凝血功能評估

表2顯示，末次隨訪時高劑量組PTTA較基線明顯增加（P=0.00156），而這種變化與低、中劑量組的變化無明顯差異。

高劑量組從第29天起PTTA明顯增加，并持續(xù)至末次隨訪（第29天P=0.0078，第57天P=0.0391，第85天P=0.0156，第169天P=0.0156）（圖4A）。

圖4B說明了AT-III在整個隨訪中的變化。第29天，我們可以看出低劑量組 (P=0.0156) 和高劑量組 (P= 0.0156) 的AT-III顯著升高，此外高劑量組的AT-III水平在第57天仍然較高(P = 0.0156)。

4.臨床特征評估

為了評估全身狀況，人們創(chuàng)建了許多方法。在本次試驗中，我們采用了最常用的方法，即Child-Pugh評分、MELD評分和SF-36量表。

Child-Pugh評分是一種用于評估肝硬化患者肝臟儲備功能的臨床評分系統(tǒng)。它包括五個臨床指標：總膽紅素、血清白蛋白濃度、凝血酶原時間（或國際標準化比值INR）、腹水的存在和程度以及肝性腦病的有無及其程度。

MELD評分（Model for End-Stage Liver Disease）是另一種用于評估終末期肝病患者預后的評分系統(tǒng)，主要用于預測患者在未來3個月內(nèi)的死亡風險。MELD評分包括血清膽紅素、肌酐和INR三個指標，并根據(jù)這些指標的測量值計算得出。

SF-36量表，全稱為36項簡短健康問卷，SF-36量表可以用來評估個體的健康狀況，以及不同健康干預措施對生活質(zhì)量的影響。

可以看出，受試者的體重保持在一個穩(wěn)定的水平，且3個不同的組顯示出相似的變化（圖5A）。低劑量組在第57天的Child-Pugh評分顯著降低（P=0.0313）（圖5B）。

我們的數(shù)據(jù)還顯示，所有3個組都過著健康的生活，并在最后一次訪視中保持良好（表3）。

我們還記錄了所有參與者在基線和所有隨訪中的癥狀。這些癥狀包括腹水、腿部水腫、嘔血、黃疸和食欲不振（從表4到表8）。

從這些記錄中我們發(fā)現(xiàn)：

• 低劑量組大部分受試者基線時有腹水，接受人臍帶間充質(zhì)干細胞治療后，8名受試者中有5名（62.5%）在第29天時腹水消失，隨著時間推移，消失人數(shù)逐漸減少，最后只有4名受試者中有1名（25%）腹水好轉(zhuǎn)。
• 中劑量組情況較好，5名受試者中有3名（60%）腹水消失。
• 高劑量組有8名受試者中有2名（25%）腹水消失。

低劑量組受試者基線時大部分出現(xiàn)腿部水腫，第57天和第85天，7人中5人（71.4%）水腫癥狀有所改善，但最后只有3人中1人（33.3%）維持了改善狀態(tài)；中劑量組有5人中1人（20%）腿部水腫消失；高劑量組有8人中1人（12.5%）水腫好轉(zhuǎn)。

高劑量組8名受試者中有1名（12.5%）黃疸減輕。

5.免疫功能評估

我們對受試者的免疫功能進行了詳細的測試，對所有受試者進行了10多項指標的檢測，在輸注人臍帶間充質(zhì)干細胞后，CD4+T細胞和CD8+T細胞在隨訪中沒有出現(xiàn)明顯的下降（圖6A，圖6B），同樣，Th1細胞和Th2細胞在4次隨訪中也沒有明顯下降。

自然殺傷細胞在低劑量組第29天明顯升高（P=0.0469），在高劑量組第57天也升高（P=0.0391）（圖6C）。

隨訪中共檢測了7種白細胞介素，不難發(fā)現(xiàn)IL-8在第29天無論低劑量組（P=0.0156）還是高劑量組（P=0.0234）均明顯下降，而高劑量組則一直下降到第169天（第57天和第169天均P=0.0156），高劑量組IL-8下降更為顯著。（圖6D） 。

低劑量組IL-17α在第57天明顯高于高劑量組（P=0.0425，中劑量組在第57天未進行全部訪視），而高劑量組IL-17α在第57天維持在0（表9）。

IL-17α（也稱為IL-17A）是一種促炎細胞因子，IL-17α水平高在大多數(shù)情況下與不良的健康狀況相關，尤其是在自身免疫性疾病中。

安全性：所有不良事件均需判斷是否與人臍帶間充質(zhì)干細胞輸注相關，但僅有低劑量組有4例不良事件可能與治療相關，大部分不良事件與人臍帶間充質(zhì)干細胞輸注完全不相關。

綜上所述，輸注后患者肝功能短期內(nèi)得到改善，ALB在第57、85天升高，第169天降至基線水平；PTTA在第29天至第157天明顯改善，IL-8在整個隨訪過程中呈下降趨勢。低、中、高劑量組6個月生存率分別為75%、75%、100%，劑量與療效的相互作用較弱。

研究結論表明， hUC-MSCs對治療乙肝相關肝硬化失代償期患者具有較大潛力，且安全性良好。

討論

我們早期在老鼠身上進行的非臨床試驗表明，人臍帶間充質(zhì)干細胞足夠安全，不會增加新生腫瘤的風險，也不會對受試者造成毒害。

在石明 ^【2】的試驗發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過75個月的研究，接受臍帶間充質(zhì)干細胞治療的患者與對照組的無肝細胞癌生存率沒有顯著差異。

在Bartolucci^【3】進行的一項人臍帶間充質(zhì)干細胞治療心力衰竭的臨床試驗，30名參與者中只有一名患者患上了惡性黑色素瘤。

在我們的試驗中，只有一名參與者在輸注后發(fā)現(xiàn)了新生肝細胞癌（HCC）。我們認為HCC的發(fā)展與人臍帶間充質(zhì)干細胞無關，因為從第一次輸注到現(xiàn)在已經(jīng)過去了3個月。此外，人臍帶間充質(zhì)干細胞實際上改善了他的整體狀況。這名患者第一次來我們醫(yī)院時有大量腹水，Child-Pugh評分為9分。當他被診斷為HCC時，腹水消失，Child-Pugh評分降至6，這使他能夠通過腹腔鏡接受RFA。

我們試驗中的大多數(shù)不良事件被歸類為1類或2類（總比例超過 70%），這表明人臍帶間充質(zhì)干細胞的毒性和其他副作用較弱。

綜上所述，間充質(zhì)干細胞的安全性可靠，為其臨床應用提供了重要的理論基礎。

結論

人臍帶間充質(zhì)干細胞在治療與乙型肝炎病毒相關的失代償性肝硬化患者方面具有巨大潛力，但需要更大的樣本量和RCT試驗來確定。

在這項的試驗中，證明了人臍帶間充質(zhì)干細胞可以在短時間內(nèi)改善肝功能，尤其是對凝血功能的影響。它也足夠安全，可以用于臨床應用，嚴重不良事件和腫瘤發(fā)展的風險較低。人臍帶間充質(zhì)干細胞對免疫系統(tǒng)幾乎沒有影響，它在某種程度上改善了患者的健康狀況。

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【1】Xian Qin, Jing Chen, Li Du, Yan Ma, Yi Li, Yu Lu, Yating Wang, and 9 moreThe research of human umbilical cord mesenchymal stem cells therapy in decompensated liver cirrhosis associated with hepatitis virus B: a long-term follow up analysis of a single-center, on-limits and stepped research.https://doi.org/10.21203/rs.3.rs-3736389/v1

【2】Shi M, Li YY, Xu RN, Meng FP, Yu SJ, Fu JL, et al. Mesenchymal stem cell therapy in decompensated liver cirrhosis: a long-term follow-up analysis of the randomized controlled clinical trial. Hepatol Int. 2021;15(6):1431-41.

【3】Bartolucci J, Verdugo FJ, Gonzalez PL, Larrea RE, Abarzua E, Goset C, et al. Safety and Efficacy of the Intravenous Infusion of Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells in Patients With Heart Failure: A Phase 1/2 Randomized Controlled Trial (RIMECARD Trial [Randomized Clinical Trial of Intravenous Infusion Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells on Cardiopathy]). Circ Res. 2017;121(10):1192-204.

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