導讀：基于間充質干細胞的易培養(yǎng)性以及多向分化潛能，被大規(guī)模應用于治療各種疾病的臨床研究上，為乙肝患者帶來新的希望。間充質干細胞通過低免疫原性、自我更新能力、多向分化潛力以及分泌多種細胞因子的能力，使得它們在促進肝組織修復和再生方面具有獨特優(yōu)勢，被用于乙肝患者的細胞替代療法。

乙型肝炎病毒(HBV)是我國最常見的致病病毒之一，其發(fā)病率較高，主要危害是肝硬化和肝細胞瘟。由于肝硬化過程不可逆，肝移植是肝硬化失代償期患者治愈的唯一方法。

但由于住院費用高、移植手術風險高以及術后持續(xù)的免疫抑制治療，導致只有少數肝硬化失代償期患者能夠接受肝臟移植以獲得更好的生活，每年國內外醫(yī)院都會接收大量肝硬化患者，但治療效果并不令人滿意，大部分患者死于肝功能衰竭、肝性腦病、食管胃底靜脈曲張出血、肝腎綜合征等并發(fā)癥。

因此科研人員努力尋求一種新的、安全、有效的治療方法，為不能接受肝移植或需要長時間等待肝移植的患者提高生活質量，延長生存期。

近年來隨著再生醫(yī)學的不斷發(fā)展，干細胞移植的出現(xiàn)，以其獨特的生物學特性，為肝病治療帶來新的治療思路。

與胚胎干細胞相比，間充質干細胞的使用避免了倫理爭議，同時降低了潛在的致瘤風險。由于間充質干細胞具有低免疫原性、自我更新能力、多向分化潛力以及分泌多種細胞因子的能力，使得它們在促進肝組織修復和再生方面具有獨特優(yōu)勢。間充質干細胞移植也成為了治療乙肝的一種極具吸引力的治療選擇。

內蒙醫(yī)科大學附屬醫(yī)院：干細胞治療11例乙肝肝硬化患者療效表現(xiàn)較好

內蒙古醫(yī)科大學附屬醫(yī)院的臨床研究人員在行業(yè)權威期刊《臨床肝病學雜志》上發(fā)表了一篇關于《人臍帶 血單個核細胞聯(lián)合人臍帶間充質干細胞療法對乙型肝炎肝硬化患者肝功能、炎癥程度及免疫功能的影響》的臨床研究報告。^【1】

該報告主要目的是探討人臍帶血單個核細胞聯(lián)合人臍帶間充質干細胞對乙型肝炎相關失代償期肝硬化患者的肝功能、炎癥程度及免疫功能的影響。

方法：研究人員選取2016年11月—2019年6月在內蒙古醫(yī)科大學附屬醫(yī)院診治的11例乙肝肝硬化患者，所納入患者第1周輸注1次hUCB－MNCs（＞18×10⁹／次），第2、3、4周每周輸注1次hUC－MSCs，每次輸注1×10⁶/kg。

在治療結束的第4、8、12周進行復查，對比治療前后肝功能、血氨、凝血因子、血清細胞因子及淋巴細胞亞群的變化，同時觀察記錄神經、精神癥狀的改變。 計量資料組間比較采用單因素重復測量方差分析。

結果

1. 輸注前后及不同時間對肝功能、血氨及其他狀況的影響

PT（Prothrombin Time）是指凝血酶原時間；PTA（Prothrombin Activity）是指凝血酶原活性。

在hUCB－MNCs聯(lián)合hUC－MSCs輸注結束后，對PT和PTA影響最快，細胞輸注結束后第4周即可顯著改善（P值均＜0.05），而患者的肝功能酶學指標在細胞輸注后第8周逐漸恢復到正常水平（P值均＜0.05），在輸注結束第12周時，肝功能指標較之前明顯好轉（P值均＜0.01）（表２）。

細胞輸注4周后，患者血清中血氨濃度明顯降低（P＜0.05），隨著時間的延長，血氨水平持續(xù)下降，除患者No. 7、10、11外，其他患者在hUCB－MNCs和hUC－MSCs輸注12周后均降低到正常水平（P值均＜0.05）（表3）。

Child-Pugh評分是一種用于評估肝硬化患者肝臟功能的臨床評分系統(tǒng)。

細胞輸注后第4、8周，5例肝硬化腹水患者的腹水均有所減少，除卻No. 10患者仍有少量腹水，且Child-Pugh分級仍然處于C級。10例患者的乏力、食欲、睡眠、精神、腹脹、下肢水腫等明顯改善，血清膽紅素及PT基本恢復正常，血清ALB也明顯升高，Child-Pugh評分隨之降低，差異有統(tǒng)計學意義（P值均＜0.05）（表4）。

2. 對血清細胞因子和淋巴細胞亞群的影響

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）是一種常用的實驗室技術，用于檢測和定量樣品中的特定蛋白質、抗體或其他抗原。

IL-6是指白細胞介素6；TNFα是指腫瘤壞死因子α

TGF-β（Transforming Growth Factor-β）是一組多功能的細胞因子，在肝病中，能抑制肝細胞的增殖

采集患者靜脈血，ELISA定量檢測hUCB－MNCs和hUC－MSCs輸注前后血清炎性和抗炎細胞因子的含量，結果顯示輸注4周后患者血清炎性細胞因子IL-6、TNFα水平均明顯降低（P值均＜0.01），從8到12周，其血清中含量持續(xù)維持在正常水平；患者血清抗炎細胞因子IL－10、TGF-β在治療后4周顯著上升（P值均＜0.01），4周后基本恢復到正常值，到治療后的12周，其表達水平一直維持在正常值（表5）。

CD3+CD4+ T淋巴細胞，通常稱為輔助T細胞（Helper T cells, Th cells），是免疫系統(tǒng)中的關鍵細胞類型。

CD4+CD25+ Treg細胞，也稱為調節(jié)性T細胞（Regulatory T cells, Tregs），是一群具有免疫調節(jié)功能的T細胞亞群。

CD3+CD8+T淋巴細胞，通常稱為細胞毒性T細胞（Cytotoxic T cells, CTLs），是免疫系統(tǒng)中負責識別和殺死受病毒感染細胞或腫瘤細胞的主要細胞類型。

CD19+ B淋巴細胞是免疫系統(tǒng)中的另一種主要細胞類型，它們負責產生抗體，參與體液免疫反應。

采用流式細胞儀分析淋巴細胞亞群比例，細胞輸注對CD3+T淋巴細胞無明顯影響，輸注4周后CD3＋CD4+T淋巴細胞和CD4＋CD25＋Treg顯著升高（P值均＜0.01）；而對CD3＋CD8+T淋巴細胞和CD19＋B淋巴細胞具有較明顯的抑制作用，此狀態(tài)一直維持至12周（表5）。

安全性評估：截至目前，11例入組治療患者均未發(fā)現(xiàn)明顯的不良反應。

綜上所述，hUCB-MNCs聯(lián)合hUC-MSCs治療肝硬化，與細胞輸注前相比較，可改善肝功能，減少炎性細胞因子產生，減輕肝臟炎癥反應以及肝細胞的破壞，升高免疫調節(jié)性T淋巴細胞，從而影響其自身免疫功能。

討論

研究發(fā)現(xiàn)人臍帶間充質干細胞（hUC－MSCs）能夠向多方向分化，如神經、骨骼、肌肉、心肌、肝細胞等^［2］，同時具有強大的修復功能^［3］。而hUC－MSCs輸入后，可以歸巢到肝臟，分化為肝細胞或進入肝臟后修復受損的肝細胞，血液內的有毒物質可以被代謝并排除體外，從而起到治療乙肝肝硬化的作用。

本研究結果證實，人臍帶血單個核細胞（hUCB－MNCs）和人臍帶間充質干細胞（hUC－MSCs）聯(lián)合輸入4周后，部分患者的血氨下降，肝硬化癥狀逐步得以控制；除此之外，hUC－MSCs還可以分化為神經細胞，同時具有強大的修復神經細胞損傷的功能^［4-5］，所以hUC－MSCs輸入后肝硬化患者精神、神經狀態(tài)不佳的情況相應減輕，筆者推斷可能與此也有一定的關系，有待進一步驗證。

結論

綜上所述人臍帶血單個核細胞和人臍帶間充質干細胞聯(lián)合輸注可以分化為肝細胞或進入肝臟后修復受損的肝細胞，抑制炎性因子釋放，上調Treg水平，從而調節(jié)肝硬化患者免疫功能，改善患者一般狀態(tài)。

這些研究結果為人臍帶血單個核細胞和人臍帶間充質干細胞聯(lián)合療法可以優(yōu)化肝功能且抑制病情發(fā)展提供了有力的依據。

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【1】韓曉, 云莎. 臍血單個核細胞與臍帶間充質干細胞聯(lián)合治療對乙肝肝硬化患者肝功能、炎癥分級及免疫功能的影響[J].臨床肝病雜志, 2021, 37(8): 1822-1828. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.08.016 .

【2】Yan Junqing, Han Tao, Zhu Zhengyan. Biological characteristics of human umbilical cord mesenchymal stem cells and their differentiation into hepatocyte-like cells[J]. World Chinese Journal of Digestion, 2008, 16(15) ： １６３９ － １６４４。 ＤＯＩ： １０。 ３９６９/ｊ。 ｉｓｎ。 １００９ －３０７９。 ２００８。 １５。 ００９。

【3】SHAN YB,FAN YW,SHl HC,et al. progress of mesenchymalstem cells in tissue engineering trachea[J]. Int J BiomedEng,2017,40(3):211-215.DOl:10.3760/cma.j.issn.1673-4181.2017.03.014.

【4】WAKAO S，MATSUSE D，DEZAWA M.Mesenchymal stemcells as a source of Schwann cells: Their anticipated use inperipheral nerve regeneration [J]. Cells Tissues Organs,2014，200(1):31-41.DO1:10.1159/000368188.

【5】BOROUJENI ME,GARDANEH M. Umbilical cord: An unlimit-ed source of cells differentiable towards dopaminergic neurons[J].Neural Regen Res,2017，12(7):1186-1192. DOI10.4103/1673 -5374.211201.

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