間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）因其獨(dú)特的免疫調(diào)節(jié)和再生特性，有望成為治療多種炎癥和自身免疫疾病的生物療法。培養(yǎng)后的間充質(zhì)干細(xì)胞會(huì)分泌多種小分子、多肽、趨化因子、細(xì)胞因子和形態(tài)發(fā)生因子，統(tǒng)稱為分泌物。宿主免疫細(xì)胞與分泌物相互作用，調(diào)節(jié)組織損傷部位的免疫反應(yīng)強(qiáng)度。除了具有免疫調(diào)節(jié)和再生能力外，其獨(dú)特的腫瘤 “歸宿 “特性使其成為攜帶抗癌藥物的理想候選者，可參與各種抗癌藥物的抗藥性（表1）。

MSCs功能	治療結(jié)果
免疫調(diào)節(jié)	減少克羅恩病期間的組織炎癥解決急性類固醇抵抗性移植物抗宿主病。多發(fā)性硬化癥患者的有效治療方法。
血管生成/血管再生	缺血小鼠皮膚的血管再生。心肌梗死中的血管生成。
抗癌藥物遞送劑	將化療藥物多西他賽 (DTX) 輸送至肺癌、將阿霉素 (DOX) 輸送至結(jié)直腸癌、將吉西他濱輸送至胰腺癌
組織愈合	MSCs的多能分化能力有助于環(huán)磷酰胺 (CTX) 引起的卵巢衰竭中卵巢的再生小鼠和人類慢性傷口的皮膚再生

1995年，Hillard Lazarus首次在臨床上探索MSCs作為細(xì)胞療法，以加速人類受試者的造血功能恢復(fù)。從那時(shí)起，多項(xiàng)臨床和臨床前研究一直在努力將MSCs確立為多種疾病的生物制藥。盡管MSCs研究隨著時(shí)間的推移不斷取得進(jìn)展，但大多數(shù)基于MSCs的試驗(yàn)仍處于I期或II期的早期階段，而只有少數(shù)（不到50個(gè)）處于III期，目前，全球只有12種產(chǎn)品（約1%）獲得上市許可。迄今為止，歐洲藥品管理局僅批準(zhǔn)了一種基于MSCs的產(chǎn)品作為治療肛周瘺的活細(xì)胞藥物，美國食品藥品管理局尚未批準(zhǔn)任何MSCs相關(guān)產(chǎn)品。

盡管臨床試驗(yàn)未能達(dá)到主要療效終點(diǎn)，但大量的臨床前動(dòng)物試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，間充質(zhì)干細(xì)胞在幾種小鼠疾病模型中的應(yīng)用效果良好。人體臨床試驗(yàn)中的細(xì)胞藥物變量是阻礙將間充質(zhì)干細(xì)胞直接轉(zhuǎn)化為臨床結(jié)果的主要障礙。

優(yōu)化間充質(zhì)干細(xì)胞移植的常用劑量和給藥途徑：現(xiàn)狀和新前沿

因此，在這篇綜述中，我們打算探索間充質(zhì)干細(xì)胞在組織損傷后的當(dāng)前應(yīng)用。我們特別關(guān)注間充質(zhì)干細(xì)胞來源、移植途徑、代謝適應(yīng)性和細(xì)胞劑量。我們進(jìn)一步討論了優(yōu)化體內(nèi)植入的潛在方法。

間充質(zhì)干細(xì)胞的組織來源

間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞MSC可從多種器官和組織來源分離，例如骨髓、臍帶、脂肪組織、胎盤、外周血、牙周膜、羊水。來自不同來源的MSC擁有相似的多潛能分化能力，包括成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞。研究還確定了MSC向神經(jīng)元細(xì)胞的分化能力。然而，它們的分化效率在組織再生的特定譜系分化過程中會(huì)有所不同。因此，在成功的臨床試驗(yàn)中，選擇合適的組織來源對(duì)于生產(chǎn)臨床級(jí)MSC至關(guān)重要（圖1）。

間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫原性

與自體間充質(zhì)干細(xì)胞相比，現(xiàn)成的、低溫保存的異體間充質(zhì)干細(xì)胞在臨床應(yīng)用中具有顯著的物流和成本優(yōu)勢。然而，要達(dá)到療效終點(diǎn)，臨床前的主要小鼠數(shù)據(jù)都支持使用合成間充質(zhì)干細(xì)胞。

由于間充質(zhì)干細(xì)胞表面表達(dá)低水平的MHCI類分子，且缺乏MHCII類表達(dá)，因此間充質(zhì)干細(xì)胞以前被認(rèn)為是 “免疫特權(quán)”。此外，在早期的研究中，研究人員發(fā)現(xiàn)異體間充質(zhì)干細(xì)胞在體外混合白細(xì)胞反應(yīng)（MLR）中能顯著延緩MHC不匹配淋巴細(xì)胞的增殖。因此，在臨床試驗(yàn)中，來自少數(shù)供體的大規(guī)模間充質(zhì)干細(xì)胞被廣泛用于治療一系列疾病，而無需擔(dān)心免疫排斥反應(yīng)。

事實(shí)上，在某些情況下，異基因間充質(zhì)干細(xì)胞可保護(hù)自身免受免疫檢測，通過短暫的 “打了就跑 “機(jī)制發(fā)揮治療活性。這在某些情況下是可能的，因?yàn)樵谶@些情況下，持續(xù)性是發(fā)揮治療效果所必需的。

集體證據(jù)表明，異體間充質(zhì)干細(xì)胞是用于急性組織損傷綜合征（如中風(fēng)、敗血癥或心肌梗塞）的唯一合理的策略。然而，在慢性退行性疾病中，由于需要長期反復(fù)輸注以維持間充質(zhì)干細(xì)胞的治療效果，因此更傾向于使用合成（自體）間充質(zhì)干細(xì)胞。

盡管異體間充質(zhì)干細(xì)胞具有免疫原性，但由于供體相關(guān)問題（患者年齡或疾病狀態(tài)）以及低成本即時(shí)護(hù)理的需要，臨床研究通常依賴于低溫保存的異體細(xì)胞。因此，避免同種異體排斥反應(yīng)和減輕移植休克的細(xì)胞修飾方法將有利于提高間充質(zhì)干細(xì)胞在臨床試驗(yàn)中的治療效用（圖1）。

間充質(zhì)干細(xì)胞移植常用給藥途徑的優(yōu)缺點(diǎn)

間充質(zhì)干細(xì)胞的給藥途徑是決定治療效果是否有效和安全的關(guān)鍵參數(shù)之一。盡管大量的臨床前和臨床試驗(yàn)都在嘗試優(yōu)化特定的給藥途徑（表2），但目前在人體臨床試驗(yàn)中還沒有就最佳的間充質(zhì)干細(xì)胞給藥方法達(dá)成共識(shí)。臨床試驗(yàn)通常選擇成本效益高且方便的靜脈輸注方法，盡管其治療效果參差不齊。根據(jù)治療要求，間充質(zhì)干細(xì)胞可通過局部和全身給藥進(jìn)行植入。

治療領(lǐng)域	給藥 途徑	MSCs來源	劑量	模型系統(tǒng)	獲得的結(jié)果  和出現(xiàn)的限制（如果有）
類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎	腹腔內(nèi)	人類脂肪來源的 MSCs	連續(xù)5天， 每天106個(gè)MSC	小鼠臨床前動(dòng)物模型	減少自身反應(yīng)性T效應(yīng)細(xì)胞反應(yīng)并誘導(dǎo)Treg細(xì)胞增殖。
自身免疫性 1 型糖尿病	尾靜脈	小鼠骨髓來源的 MSCs	每周一次，每次5×105MSCs， 持續(xù)4周	小鼠臨床前動(dòng)物模型	降低自身反應(yīng)性T效應(yīng)細(xì)胞反應(yīng)并誘導(dǎo)Treg細(xì)胞增殖
心肌梗塞	單層 MSCs 移植	大鼠脂肪來源的 MSCs	9.4±0.6×105單層MSCs移植真皮成纖維細(xì)胞	大鼠臨床前動(dòng)物模型	逆轉(zhuǎn)心肌梗塞大鼠疤痕區(qū)域壁變薄現(xiàn)象并改善心臟功能。
急性肺損傷	尾 靜脈	小鼠骨髓來源的 MSCs	2×106MSCs，持續(xù)一周	小鼠臨床前動(dòng)物模型	抑制Th2介導(dǎo)的過敏性氣道炎癥
移植物抗宿主病 (GVHD)	全身輸注	同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞	2×106；8×106hMSC/千克	II期臨床試驗(yàn)	MSCs治療組表現(xiàn)出較小的GVHD反應(yīng)，且無輸注毒性或異位組織形成
心肌梗塞	全身輸注	同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞	0.5×106；1.6×106；5.0×106hMSC/千克	I期臨床試驗(yàn)	MSCs移植患者組肺功能增強(qiáng)。
肝硬化	全身輸注	自體骨髓來源的 MSCs	4.0×107（每次注射的總hMSC數(shù)）	I-II期臨床試驗(yàn)	MELD評(píng)分、凝血酶原 復(fù)合物和血清肌酐水平降低；血清白蛋白水平改善。 研究的局限性：移植后無法追蹤MSCs。
肌萎縮側(cè)索硬化癥 (ALS)	肌肉注射和鞘內(nèi)注射聯(lián)合給藥	自體骨髓來源的 MSCs	1×106細(xì)胞/kg鞘內(nèi)注射，24×106細(xì)胞肌肉注射；1.5×106細(xì)胞/kg鞘內(nèi)注射，36×106細(xì)胞肌肉注射；2×106細(xì)胞/kg鞘內(nèi)注射，48×106細(xì)胞肌肉注射	II期臨床試驗(yàn)	減緩病情進(jìn)展速度。研究的局限性：研究組規(guī)模較小。

01靜脈注射

優(yōu)點(diǎn)：此途徑是全身MSC輸送的主要方法。靜脈輸注被認(rèn)為是人體臨床試驗(yàn)中常規(guī)且安全的方法。根據(jù)最近對(duì)人體MSC臨床試驗(yàn)的調(diào)查，超過40%的研究為各種臨床疾病植入了中位數(shù)為1億個(gè)MSC。

缺點(diǎn)：盡管如此，許多報(bào)告發(fā)現(xiàn)靜脈輸注的MSC被困在肺部，隨后不久就會(huì)被清除。由于旁分泌功能支持MSC的治療活性，因此移植細(xì)胞壽命的縮短會(huì)削弱其治療活性。最近的一項(xiàng)小鼠臨床前研究發(fā)現(xiàn)，反復(fù)靜脈輸注最大耐受劑量（5000萬個(gè)細(xì)胞/公斤體重）的健康MSC未能影響結(jié)腸炎臨床結(jié)果。

02動(dòng)脈注射

優(yōu)點(diǎn)：與靜脈注射相比，動(dòng)脈內(nèi)（IA）注射方法更有效，因?yàn)樗鼫p少了肺中的細(xì)胞捕獲，并誘導(dǎo)目標(biāo)組織損傷部位的移植細(xì)胞遷移。

缺點(diǎn)：有趣的是，很少有研究發(fā)現(xiàn)IA輸送MSCs存在不良影響。盡管IA注射是有效將細(xì)胞靶向大腦的首選途徑，但最近的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，IA輸送MSCs治療中風(fēng)可能存在腦梗塞風(fēng)險(xiǎn)。因此，為了最佳地使用IA方法，必須仔細(xì)考慮細(xì)胞大小、細(xì)胞劑量和輸注速度。

03腹膜內(nèi) (IP) 或皮下 (SC)

盡管腹膜內(nèi) (IP) 或皮下 (SC) 給藥在臨床試驗(yàn)中并不像靜脈注射那樣常用，但臨床前研究已證實(shí)它們在各種疾病康復(fù)中的治療作用。腹膜內(nèi) (IP) 或皮下 (SC) 給藥在陰道擴(kuò)張損傷大鼠模型中通過增加漏尿點(diǎn)壓力恢復(fù)尿道括約肌功能。

04局部注射

優(yōu)點(diǎn)：局部施用MSCs旨在增加治療細(xì)胞在目標(biāo)部位的植入，從而立即產(chǎn)生局部作用或分化為功能性細(xì)胞。MSCs的局部給藥方法已被確定為侵入性最小的方法，并且對(duì)于傷口愈合、燒傷或糖尿病相關(guān)傷口的皮膚移植存活以及修復(fù)實(shí)體器官及其相關(guān)組織（如心臟、大腦、脊髓組織、肝臟等）的損傷非常有效。

肌肉內(nèi)輸注 (IM) 與靜脈注射途徑一樣，也被認(rèn)為是MSCs輸送的微創(chuàng)和簡單途徑。此外，與其他傳統(tǒng)途徑相比，肌肉內(nèi)輸注途徑可延長植入MSCs的存活時(shí)間，這有助于改善治療效果。

缺點(diǎn)：MSCs局部注射雖然可以促進(jìn)治療效果的提高，但有時(shí)會(huì)造成創(chuàng)傷，其侵襲可能造成大出血和繼發(fā)性損傷。

綜合證據(jù)表明，每種遞送方法都有各自的優(yōu)點(diǎn)和局限性。因此，應(yīng)根據(jù)研究目的、靶器官的大小和所用的動(dòng)物模型來選擇細(xì)胞遞送途徑。

間充質(zhì)干細(xì)胞的最佳時(shí)機(jī)/劑量/適應(yīng)性

時(shí)間：最佳細(xì)胞輸送時(shí)機(jī)對(duì)于最大限度地發(fā)揮MSCs的臨床效果至關(guān)重要，因?yàn)樗梢哉{(diào)節(jié)移植細(xì)胞的存活時(shí)間。

在任何成功的臨床試驗(yàn)之前，需要進(jìn)行比較研究以優(yōu)化組織或器官愈合過程的三個(gè)階段的MSCs輸送時(shí)間：即損傷期（幾小時(shí)）、修復(fù)期（幾天）和重塑期（幾周）。

心肌梗死急性損傷期的細(xì)胞毒性環(huán)境會(huì)降低移植MSCs的功能特性。而在修復(fù)期，即急性心肌梗死后4至7天輸送干細(xì)胞可顯示出最大的治療效果。

同樣，新生兒缺氧缺血性損傷后3天或10天進(jìn)行MSCs移植，運(yùn)動(dòng)行為得到最大改善，但17天移植的治療效果明顯降低。

劑量：輸送的MSC數(shù)量是可以調(diào)整以實(shí)現(xiàn)最佳治療效果的重要因素。移植的間充質(zhì)干細(xì)胞的適當(dāng)數(shù)量取決于器官、組織和動(dòng)物種類。例如，單次治療中大量細(xì)胞可能并不總是偏向積極的治療結(jié)果。靜脈內(nèi)移植的細(xì)胞劑量過高可能會(huì)導(dǎo)致肺部毛細(xì)血管堵塞，導(dǎo)致治療效果不佳。相反，根據(jù)http://clinicaltrials.gov/的報(bào)告，靜脈注射途徑具有最高的平均MSC劑量，將移植的細(xì)胞困在肺部可能是這種最高劑量的原因。

臨床試驗(yàn)確定的治療脊髓損傷患者的最佳劑量范圍是0.5×10⁶-5×10⁶MSCs/kg接受者體重。此外，在某些情況下，以一定間隔重復(fù)長期輸注似乎可以刺激產(chǎn)生積極的結(jié)果。盡管靜脈輸注MSCs是最安全的方式，但其主要缺點(diǎn)是輸送細(xì)胞的最大量受到限制，這與嚙齒動(dòng)物模型不同。在嚙齒動(dòng)物中，靜脈移植的最佳細(xì)胞濃度為50M/Kg，而在人類中，最佳劑量為1-2M/Kg體重。如果不同物種的功能生物機(jī)制相似且具有劑量依賴性，那么MSCs劑量的這種物種特異性差異將預(yù)示人類的結(jié)果會(huì)出現(xiàn)負(fù)面偏差。

適應(yīng)性：各種臨床前機(jī)制研究證實(shí)，MSC通過釋放多種旁分泌可溶性因子發(fā)揮局部和全身免疫抑制作用。由于代謝適應(yīng)性對(duì)旁分泌功能至關(guān)重要，因此主要的動(dòng)物研究利用具有最佳代謝適應(yīng)性和高復(fù)制能力的培養(yǎng)挽救的對(duì)數(shù)期MSC。然而，人體臨床試驗(yàn)通常使用預(yù)先儲(chǔ)存的冷凍保存的同種異體MSC，立即解凍并在護(hù)理時(shí)注入。重要的是，在從冷凍保存中恢復(fù)后的前24小時(shí)內(nèi)，MSC表達(dá)不同的細(xì)胞損傷標(biāo)志物。

因此，集體證據(jù)表明，代謝適應(yīng)性是造成物種間結(jié)果差異的主要因素之一。制定減少細(xì)胞衰老或拯救MSC免受冷凍損傷的策略將改善MSC的臨床應(yīng)用。Chinnadurai等人證明IFNγ預(yù)許可刺激了衰老MSC中的多個(gè)免疫調(diào)節(jié)基因，并顯著改善了衰老MSC的免疫抑制作用。四大策略優(yōu)化間充質(zhì)干細(xì)胞在臨床中發(fā)揮最大效用

MSCs分泌大量細(xì)胞因子、趨化因子，這些因子通過增強(qiáng)抗炎T調(diào)節(jié)細(xì)胞 (Treg) 功能、激活M2巨噬細(xì)胞極化和降低效應(yīng)淋巴細(xì)胞功能來減輕炎癥。MSCs還分泌促進(jìn)組織再生的形態(tài)發(fā)生素和外泌體。

MSCs因其具有自我再生、免疫調(diào)節(jié)和多能性、易于獲取、易于分離和培養(yǎng)擴(kuò)增等強(qiáng)大的內(nèi)在特性而受到廣泛歡迎。

人們已經(jīng)廣泛研究了基因改造或預(yù)處理方法，以提高M(jìn)SCs在體內(nèi)的持久性和治療效用。

01、免疫抑制特性

已經(jīng)發(fā)現(xiàn)不同的方法（如細(xì)胞因子預(yù)先許可或基因改造）可增強(qiáng)MSCs的免疫抑制作用。

用IL-1b預(yù)處理的MSC可產(chǎn)生更高水平的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子，例如 TNF-a、IL-6、IL-8和IL-23A以及趨化因子，例如CCL5、CCL20、CXCL1、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL10和CXCL11。此外，IL1b預(yù)處理可提高M(jìn)SC在體外募集中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞的能力。

02、細(xì)胞衰老和移植物存活

體內(nèi)移植后，宿主組織惡劣的微環(huán)境通常會(huì)導(dǎo)致MSC過早死亡或細(xì)胞衰老，進(jìn)而導(dǎo)致MSC功能下降。

據(jù)報(bào)道，過表達(dá)肝細(xì)胞生長因子 (HGF) 或缺氧誘導(dǎo)因子1α (HIF1A) 的 MSC也具有抗凋亡作用，因此對(duì)多種疾病的恢復(fù)具有很高的治療效果。

預(yù)防衰老是另一種MSC改造方法，可以阻止不可逆的細(xì)胞增殖并提高 MSC的治療功能。

IFN-γ刺激也被認(rèn)為是一種細(xì)胞凋亡預(yù)防方法，可在體外保護(hù)MSCs免受NK細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性。

03、延長異基因間充質(zhì)干細(xì)胞存活時(shí)間的策略

由于臨床前研究發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細(xì)胞的存續(xù)與治療效果之間存在直接關(guān)聯(lián)，因此預(yù)防同種異體排斥和延長MSC存續(xù)的方法將成為臨床研究中必不可少的工具。修改宿主或移植的MSC是避免同種異體MSC排斥的可能方法。將特定劑量的免疫抑制藥物與同種異體MSC一起使用是研究最充分的預(yù)防移植排斥的方法。

04、體外效力測定的重要性

高級(jí)臨床試驗(yàn)要求進(jìn)行MSC身份和效力測定，以衡量其治療效用。此功能測試可確保每個(gè)MSC制造批次的質(zhì)量或有效性，這些批次在細(xì)胞來源和制造工藝層面上各不相同。MSC會(huì)響應(yīng)體內(nèi)環(huán)境線索分泌多種免疫調(diào)節(jié)和再生分子。因此，開發(fā)測定矩陣方法的主要是確定對(duì)MSC在人體中再生功能至關(guān)重要的因素組合。

未來研究方向

成功的間充質(zhì)干細(xì)胞臨床試驗(yàn)依賴于間充質(zhì)干細(xì)胞的內(nèi)在功能，例如間充質(zhì)干細(xì)胞的歸巢特性、有效分化、增殖以及旁分泌或內(nèi)分泌影響的應(yīng)用。組織來源、代謝適應(yīng)性、劑量和輸送途徑是維持間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)在功能的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因素。

對(duì)于有效且安全的間充質(zhì)干細(xì)胞臨床試驗(yàn)，了解宿主免疫細(xì)胞與間充質(zhì)干細(xì)胞衍生分泌體之間的串?dāng)_分子機(jī)制至關(guān)重要。

需要深入了解間充質(zhì)干細(xì)胞的作用機(jī)制和生物學(xué)特性，這些間充質(zhì)干細(xì)胞通過不同的制造工藝收集，以提高其治療效力。正確選擇最佳細(xì)胞輸送途徑、時(shí)間和劑量的知識(shí)對(duì)于提高間充質(zhì)干細(xì)胞的存活率和整體功能至關(guān)重要。

此外，為了取得進(jìn)一步進(jìn)展，應(yīng)在目前缺乏有效治療的各種炎癥疾病模型中探索結(jié)合最佳輸送、劑量、預(yù)處理和追蹤的方法。應(yīng)重點(diǎn)開發(fā)不同的基因修飾策略，通過針對(duì)與年齡相關(guān)的信號(hào)通路、活性氧和自噬因子來增強(qiáng)老年間充質(zhì)干細(xì)胞的效果。

參考資料：Jayeeta Giri (2024) Optimizing Mesenchymal Stromal Cells Delivery: Present Status and New Frontiers in Regenerative Medicine. J Stem Cell Rep 6: 1-16

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