衰老的特點(diǎn)是生理功能逐漸喪失，是世界上幾種最普遍疾病的危險(xiǎn)因素。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的預(yù)測(cè)，到2050年，中國(guó)、美國(guó)和幾個(gè)歐洲國(guó)家的60歲或以上人口將超過(guò)30%，隨著年齡的增長(zhǎng)，癌癥、T2DM（2型糖尿病）、神經(jīng)退行性疾病和心血管疾病等相關(guān)疾病的發(fā)病率也會(huì)增加。

通常，衰老與免疫系統(tǒng)功能的進(jìn)行性下降有關(guān)，其中自然殺傷 (NK) 細(xì)胞和T細(xì)胞分別是先天免疫和適應(yīng)性免疫的關(guān)鍵成分。NK細(xì)胞以表達(dá)CD16和CD56為特征，作為抵御病毒感染和癌細(xì)胞的第一道防線發(fā)揮關(guān)鍵作用。年輕人具有高水平的功能性NK細(xì)胞。然而，NK相關(guān)活動(dòng)隨著年齡的增長(zhǎng)而下降，導(dǎo)致病毒感染的發(fā)生率和嚴(yán)重程度增加。

最近，上海長(zhǎng)征醫(yī)院輸血科、上海交通大學(xué)免疫研究所等單位合作在《Frontiers in Immunology》上發(fā)文，首次從數(shù)據(jù)層面證實(shí)了自體NK細(xì)胞輸注能顯著緩解T細(xì)胞衰老、衰竭，抑制關(guān)鍵成分SASP(衰老相關(guān)分泌表型）的有效方法，特別是針對(duì)免疫系統(tǒng)，衰老可以通過(guò)NK細(xì)胞輸注讓其向更年輕的方向發(fā)展。

方法：在這里，招募了37名中年健康參與者，其中32名靜脈注射了擴(kuò)增的NK細(xì)胞，5名注射了生理鹽水。

然后，我們通過(guò)流式細(xì)胞儀監(jiān)測(cè)輸注后4周內(nèi)外周衰老和衰竭T細(xì)胞的變化，以及衰老相關(guān)分泌表型 (SASP) 相關(guān)因子的血清水平。進(jìn)行體外共培養(yǎng)試驗(yàn)以研究NK介導(dǎo)的對(duì)衰老或衰竭T細(xì)胞的細(xì)胞毒活性。

結(jié)果：NK細(xì)胞輸注后，代表衰老細(xì)胞的CD28-、CD57+、CD28- CD57+和CD28-KLRG1+CD4+和CD8+T細(xì)胞群顯著減少，PD-1+和TIM-3+T細(xì)胞也顯著減少。這些變化連續(xù)觀察了4周。然而，在生理鹽水組中沒(méi)有觀察到顯著變化。

此外，NK細(xì)胞輸注后，SASP相關(guān)因子包括IL-6、IL-8、IL-1α、IL-17、MIP-1α、MIP-1β和MMP1顯著降低。

進(jìn)一步的共培養(yǎng)試驗(yàn)表明，擴(kuò)增的NK細(xì)胞特異性地顯著消除了衰老的CD4+CD28以外的T細(xì)胞+CD4+T細(xì)胞。它們還顯示出改善的細(xì)胞活性，具有不同的激活和抑制受體表達(dá)模式，包括 NKG2C、NKG2A、KLRG1、LAG3、CD57和TIM3。

最終研究結(jié)果表明，T細(xì)胞衰老和衰竭在健康個(gè)體中是一個(gè)可逆的過(guò)程，可以引入自體NK細(xì)胞來(lái)緩解衰老。

臨床試驗(yàn)注冊(cè)：ClinicalTrials.gov，ChiCTR-OOh-17011878。

自體NK細(xì)胞輸注的安全性

NK細(xì)胞給藥后，所有受試者的體溫和血壓均正常。沒(méi)有人出現(xiàn)皮疹、局部感染和出血、發(fā)燒、發(fā)冷、呼吸困難、惡心和嘔吐。然而，一名受試者在細(xì)胞輸注后1周內(nèi)出現(xiàn)了腹痛癥，此后恢復(fù)。一個(gè)人在細(xì)胞輸注后1周內(nèi)出現(xiàn)頭暈，這種現(xiàn)象持續(xù)了2周才恢復(fù)。兩名受試者出現(xiàn)疲勞，其中一名出現(xiàn)輕度疲勞，另一名出現(xiàn)媒體疲勞，均在2周內(nèi)恢復(fù)。

此外，我們?cè)诩?xì)胞輸注后1個(gè)月進(jìn)行了常規(guī)血液檢查、血液學(xué)檢查以及尿液和病毒學(xué)檢查。根據(jù)血清ALT、AST、尿素和肌酐水平正常，未觀察到肝毒性和腎毒性。

此外，未觀察到異常的C反應(yīng)蛋白 (CRP)、抗甲狀腺球蛋白抗體 (TGAb) 和抗甲狀腺過(guò)氧化物酶自身抗體 (TPOAb) 活性，表明未發(fā)生免疫反應(yīng)和自身免疫效應(yīng)。此外，1個(gè)月后未觀察到血漿甲胎蛋白 (AFP) 和癌胚抗原 (CEA) 水平升高，這有力地證實(shí)了自體NK細(xì)胞輸注在致瘤性方面是安全的。

NK細(xì)胞輸注后衰老的T細(xì)胞減少

先前的研究已經(jīng)證明，衰老細(xì)胞的積累會(huì)加速與衰老相關(guān)的疾病，而p16陽(yáng)性細(xì)胞的清除會(huì)延遲這種現(xiàn)象。NK細(xì)胞在先天免疫中發(fā)揮重要作用，用于清除衰老細(xì)胞和防御癌癥。研究結(jié)果顯示，NK細(xì)胞輸注后1周和4周，表現(xiàn)為CD28-、KLRG1+的CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞顯著減少。這代表T細(xì)胞衰老指標(biāo)顯著得到改善。

NK細(xì)胞輸注緩解T細(xì)胞衰竭狀態(tài)

在慢性感染和癌癥期間，記憶T細(xì)胞隨著持續(xù)的抗原暴露和炎癥而分化。據(jù)報(bào)道，人類(lèi)T細(xì)胞衰竭發(fā)生在病毒感染期間，例如HIV和丙型肝炎病毒 (HCV)，以及癌癥發(fā)展。

結(jié)果顯示，NK細(xì)胞輸注1周后CD4+PD-1+T細(xì)胞、CD8+PD-1+T細(xì)胞、CD4+TIM-3+T細(xì)胞和CD8+TIM-3+T細(xì)胞均顯著減少和4周。這些結(jié)果表明，NK細(xì)胞輸注可能通過(guò)減輕T細(xì)胞的耗竭狀態(tài)來(lái)改善T細(xì)胞的功能。此外，在NK細(xì)胞輸注后1周和4周，PD-1+和TIM-3+T細(xì)胞的減少與性別無(wú)關(guān)。

細(xì)胞類(lèi)型影響NK細(xì)胞輸注誘導(dǎo)的效果

在接受NK細(xì)胞的32名參與者中，14名志愿者重新注射了從冷凍保存的PBMC中擴(kuò)增的NK細(xì)胞，18名志愿者重新注射了從新鮮PBMC中產(chǎn)生的NK細(xì)胞。我們想探討NK細(xì)胞輸注誘導(dǎo)的免疫系統(tǒng)改變是否依賴(lài)于NK細(xì)胞的初始狀態(tài)。我們通過(guò)單向方差分析對(duì)這兩組進(jìn)行了多重比較。

結(jié)果顯示，新鮮NK細(xì)胞輸注組1周或4周時(shí)TIM3+、KLRG1+、CD28-CD57+、CD28-KLRG1+T細(xì)胞明顯減少，而新鮮NK細(xì)胞輸注組與冷凍NK細(xì)胞輸注組相比，CD28-、CD57+和PD-1+T細(xì)胞沒(méi)有顯著變化。

NK細(xì)胞輸注后關(guān)鍵SASP相關(guān)因素減少

衰老細(xì)胞隨著衰老而積累并導(dǎo)致SASP相關(guān)因子的釋放，包括促炎細(xì)胞因子（IL-1α、IL-17和 IL-6）、趨化因子（IL-8）和蛋白酶（MMP-1、MMP-1α和MMP-1β）。這些SASP相關(guān)因素在與衰老相關(guān)的炎癥、疾病和發(fā)病率中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

研究結(jié)果表明，NK細(xì)胞輸注顯著降低了包括IL-6、IL-8、IL-1α、IL-17、MIP-1α、MMP-1β以及MMP1在內(nèi)的SASP相關(guān)因子，進(jìn)一步提示NK細(xì)胞輸注能夠有效改善衰老指標(biāo)。

討論

在這里，我們首次發(fā)現(xiàn)，在中年健康個(gè)體中單次給藥自體NK細(xì)胞不僅顯著減少外周衰老和衰竭T細(xì)胞，而且降低了關(guān)鍵SASP相關(guān)因子的分泌。

有充分證據(jù)表明，隨著年齡的增長(zhǎng)，免疫系統(tǒng)會(huì)逐漸衰退和惡化，進(jìn)而導(dǎo)致感染的發(fā)生率和嚴(yán)重程度增加，對(duì)疫苗的反應(yīng)受損，并加速癌癥的發(fā)展。因此，制定有效的措施來(lái)消除或至少緩解免疫功能障礙現(xiàn)象，在理論上和實(shí)踐上都可以恢復(fù)或改善免疫系統(tǒng)的保護(hù)功能。

值得注意的是，自體NK細(xì)胞輸注被證明對(duì)人類(lèi)使用是安全的，因?yàn)闆](méi)有觀察到不良事件。

我們還研究了NK細(xì)胞介導(dǎo)的T細(xì)胞衰老和衰竭緩解是否僅限于受試者的性別。男性和女性組的趨勢(shì)沒(méi)有顯著差異，這強(qiáng)烈暗示NK細(xì)胞輸注誘導(dǎo)的效果與性別無(wú)關(guān)。此外，新鮮PBMC產(chǎn)生的NK細(xì)胞顯示出顯著影響更多衰老和衰竭T細(xì)胞的指標(biāo)，表明新鮮PBMC 更適合啟動(dòng)NK細(xì)胞擴(kuò)增。
結(jié)論

總之，本研究最初揭示了NK細(xì)胞輸注對(duì)中年健康個(gè)體T細(xì)胞功能障礙和細(xì)胞衰老的影響。我們的研究結(jié)果表明，自體NK細(xì)胞給藥是顯著緩解T細(xì)胞衰老和衰竭以及SASP的關(guān)鍵成分的有效方法。postNK細(xì)胞顯示出改善的細(xì)胞毒活性，可以特異性和直接識(shí)別和消除衰老的T細(xì)胞。

進(jìn)一步臨床數(shù)據(jù)證明了對(duì)于免疫系統(tǒng)而言，可以通過(guò)自體NK細(xì)胞的轉(zhuǎn)移向更年輕的方向進(jìn)行操縱。進(jìn)一步探索應(yīng)集中在自體NK細(xì)胞影響T細(xì)胞衰老和衰竭的分子機(jī)制上。此外，進(jìn)一步研究這些衰老和衰竭的T細(xì)胞群、它們的起源以及它們?cè)诿庖卟±項(xiàng)l件下的功能將極大地促進(jìn)NK免疫療法的臨床應(yīng)用。

參考資料：

Tang X, Deng B, Zang A, He X, Zhou Y, Wang D, Li D, Dai X, Chen J, Zhang X, Liu Y, Xu Y, Chen J, Zheng W, Zhang L, Gao C, Yang H, Li B, Wang X. Characterization of age-related immune features after autologous NK cell infusion: Protocol for an open-label and randomized controlled trial. Front Immunol. 2022 Sep 29;13:940577. doi: 10.3389/fimmu.2022.940577. PMID: 36248873; PMCID: PMC9562930.

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