近年來，國(guó)際上在開發(fā)用于治療嚴(yán)重和廣泛性疾病的人類多能干細(xì)胞 (hPSC) 衍生產(chǎn)品方面取得了重大進(jìn)展。細(xì)胞起始材料的生物庫是提供安全且符合法規(guī)要求的細(xì)胞療法的關(guān)鍵組成部分。

在中國(guó)，這些發(fā)展的關(guān)鍵參與者是最近成立的國(guó)家干細(xì)胞資源中心 (NSCRC)?及其在廣州和上海的合作組織，它們共有600多個(gè)hPSC系正式記錄在中國(guó)科技部的干細(xì)胞登記處。

本文，我們描述了中國(guó)在建立用于細(xì)胞療法制造的人類多能干細(xì)胞方面的最新進(jìn)展，以及目前已建立的重要國(guó)內(nèi)和國(guó)際協(xié)調(diào)，以促進(jìn)中國(guó)基于人類多能干細(xì)胞的產(chǎn)品按照國(guó)內(nèi)和國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)化為臨床用途。

1、引言

最近幾年，國(guó)際上在開發(fā)用于治療嚴(yán)重和廣泛性疾病的人類多能干細(xì)胞 (hPSC) 衍生產(chǎn)品方面取得了重大進(jìn)展。細(xì)胞起始材料的生物庫是提供安全且符合法規(guī)要求的細(xì)胞療法的關(guān)鍵組成部分。這需要仔細(xì)記錄供體細(xì)胞采購(gòu)、細(xì)胞系生成、生物庫、質(zhì)量控制和向最終用戶發(fā)布的所有關(guān)鍵階段。

近年來，中國(guó)有關(guān)干細(xì)胞臨床應(yīng)用的法規(guī)已得到徹底修訂，為基于hPSC的產(chǎn)品的開發(fā)提供了新的框架。中國(guó)干細(xì)胞生物學(xué)會(huì)也一直在制定干細(xì)胞使用的核心標(biāo)準(zhǔn)，而北京干細(xì)胞庫 (BSCB) 是制定這些標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)鍵參與者。BSCB由中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所 (IOZ-CAS) 于2007年成立。

2019年6月，BSCB重新指定為國(guó)家干細(xì)胞資源中心 (NSCRC)。NSCRC已與廣州和上海的合作組織合作，在中國(guó)科技部的干細(xì)胞登記處注冊(cè)了hPSC系，并且NSCRC還一直在與歐盟委員會(huì)資助的數(shù)據(jù)庫hPSCreg（www.hpscreg.eu）開展合作。

NSCRC現(xiàn)已開始使用其人類胚胎干細(xì)胞 (hESC) 系來生產(chǎn)八種適合臨床使用的細(xì)胞類型，這些細(xì)胞類型正在用于9項(xiàng)針對(duì)不同適應(yīng)癥的臨床研究。IOZ-CAS也是國(guó)際干細(xì)胞銀行計(jì)劃 (www.iscbi.org) 的創(chuàng)始合作伙伴，該計(jì)劃將主要干細(xì)胞銀行聚集在一起，商定提供用于研究和臨床用途的多能干細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)。

• 本文介紹了中國(guó)在建立經(jīng)認(rèn)證可用于細(xì)胞治療生產(chǎn)的hPSC方面的最新進(jìn)展，以促進(jìn)中國(guó)基于hPSC的產(chǎn)品按照國(guó)家和國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)化為臨床應(yīng)用。
• 我們還首次介紹了中國(guó)科學(xué)院國(guó)家干細(xì)胞資源中心、新成立的干細(xì)胞與再生研究所 (ISCR) 和IOZ-CAS之間的最新合作，這些合作正在推動(dòng)建立新的干細(xì)胞使用國(guó)家和國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。
• 我們還介紹了這些組織如何促進(jìn)主要國(guó)家和國(guó)際干細(xì)胞機(jī)構(gòu)之間的協(xié)調(diào)，以及國(guó)家干細(xì)胞資源中心為確定其細(xì)胞系是否適用于臨床研究而采取的方法。

2、中國(guó)建立并驗(yàn)證的人類干細(xì)胞系

在中國(guó)，有一個(gè)正式的干細(xì)胞系評(píng)估程序，由中國(guó)科技部監(jiān)督，迄今為止已批準(zhǔn)了600多個(gè)hPSC。這些hPSC大部分來自北京、上海和廣州的三個(gè)中心，每個(gè)中心都有hESC和人類誘導(dǎo)多能干細(xì)胞 (hiPSC)。

此外，其中47個(gè)細(xì)胞系還已在國(guó)際數(shù)據(jù)庫hPSCreg（www.hpscreg.eu）上注冊(cè)，該數(shù)據(jù)庫評(píng)估道德出處，例如知情同意和科學(xué)數(shù)據(jù)的驗(yàn)證，以驗(yàn)證該細(xì)胞系是否為hPSC。這些細(xì)胞系一旦通過hPSCreg認(rèn)證，就會(huì)被歐盟委員會(huì) (EC) 視為適合用于歐盟資助的研究項(xiàng)目。

3、NSCRC細(xì)胞庫的質(zhì)量和組成

自2007年以來，NSCRC已建立潔凈室設(shè)施和研究實(shí)驗(yàn)室，生產(chǎn)hESC系和經(jīng)批準(zhǔn)的hESC衍生產(chǎn)品類型，這些產(chǎn)品均根據(jù)中國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局 (CFDA) 的良好生產(chǎn)規(guī)范 (GMP) 許可生產(chǎn)。

NSCRC是IOZ-CAS的一個(gè)部門，已發(fā)表了大量關(guān)于其在臨床使用的hESC系的儲(chǔ)存和分化方面的工作的高質(zhì)量科學(xué)論文，并在干細(xì)胞領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)制定中發(fā)揮著重要的國(guó)家和國(guó)際作用。

國(guó)家干細(xì)胞資源中心是中國(guó)第一家根據(jù)ISO9001:2015認(rèn)證獲得臨床使用細(xì)胞系供應(yīng)資格的多能干細(xì)胞庫，并定期接受CFDA的GMP檢查。它也是中國(guó)第一家成功通過中國(guó)國(guó)家認(rèn)可委員會(huì) (CNAS) 檢查的生物庫，符合國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)組織 (ISO) 于2019年發(fā)布的通用生物庫ISO20387標(biāo)準(zhǔn)。

如今，國(guó)家干細(xì)胞資源中心已制備了350多個(gè)hESC主細(xì)胞庫，其中進(jìn)入臨床試驗(yàn)的細(xì)胞均經(jīng)過獨(dú)立測(cè)試，并由國(guó)家食品藥品檢定研究院 (NIFDC) 認(rèn)證可用于臨床。整個(gè)庫提供了具有多種人類白細(xì)胞抗原 (HLA) 的細(xì)胞，可能有助于針對(duì)中國(guó)人口中70%的HLA-A、HLA-B進(jìn)行細(xì)胞藥物的組織類型匹配。

國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局細(xì)胞系在其制備的15個(gè)不同方面接受記錄可追溯性的檢查，涵蓋細(xì)胞系開發(fā)的所有階段，從捐贈(zèng)者同意、胚胎移植到NSCRC，到在進(jìn)行臨床試驗(yàn)或研究工作之前進(jìn)行儲(chǔ)存和測(cè)試。

所有文件都整理到一份單獨(dú)的檔案中，稱為“Q-Book”，用于每個(gè)單獨(dú)的細(xì)胞系，以提供中央?yún)⒖甲鳛槠溥m合臨床使用的證據(jù)。所有用于臨床的細(xì)胞系的詳細(xì)測(cè)試方案于2017年首次發(fā)布，作為NSCRC生物庫流程的一部分進(jìn)行的測(cè)試總結(jié)在下面的要點(diǎn)列表中。

1. 細(xì)胞身份（DNA短串聯(lián)重復(fù)和同工酶分析）。
2. 細(xì)菌、真菌和支原體檢測(cè)，包括內(nèi)毒素檢測(cè)。
3. 檢測(cè)特定病毒（人類免疫缺陷病毒（I和II）、人類肝炎病毒（B和C）、Epstein-Barr病毒、人類巨細(xì)胞病毒和梅毒螺旋體。
4. 一旦選定細(xì)胞系用于臨床研究，就會(huì)進(jìn)行一般病毒污染測(cè)試，包括逆轉(zhuǎn)錄酶活性、雞胚尿囊液血凝試驗(yàn)、接種動(dòng)物存活率以及牛和豬病毒的其他測(cè)試。
5. 細(xì)胞特征：
6. 細(xì)胞培養(yǎng)中典型的hESC系形態(tài)，
7. 使用免疫熒光法和RT-PCR檢測(cè)干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物，
8. 胚狀體分化產(chǎn)生的多能性潛力，
9. 核型（中期擴(kuò)散的Geimsa顯帶）。

這里報(bào)告的所有細(xì)胞特性分析均由國(guó)家干細(xì)胞資源中心工作人員根據(jù)國(guó)家干細(xì)胞資源中心質(zhì)量管理體系下制定的SOP執(zhí)行。NIFDC是干細(xì)胞產(chǎn)品獨(dú)立質(zhì)量控制的國(guó)家中心，對(duì)選定用于臨床研究的細(xì)胞系主庫存樣品進(jìn)行了廣泛的安全測(cè)試。

IOZ-CAS生物醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查并批準(zhǔn)了NSCRC細(xì)胞系在研究和臨床應(yīng)用中的使用，捐贈(zèng)IVF中心也審查并批準(zhǔn)了NSCRC細(xì)胞系在臨床應(yīng)用中的使用。后者的批準(zhǔn)程序是為了確保所有參與細(xì)胞系采購(gòu)和開發(fā)的人員都能接受捐贈(zèng)胚胎細(xì)胞的未來預(yù)期用途。NSCRC衍生的所有細(xì)胞系都被視為將用于開發(fā)基于細(xì)胞的藥物。

因此，所有細(xì)胞系（包括最近分配給研究用途的細(xì)胞系）都以與用于基于細(xì)胞的藥物開發(fā)的細(xì)胞系完全相同的方式和在相同的設(shè)施中記錄和開發(fā)。希望在自己的研究中使用NSCRC細(xì)胞系的研究人員可以聯(lián)系NSCRC的作者。

4、多能干細(xì)胞的臨床應(yīng)用

國(guó)家干細(xì)胞資源中心開展了一系列本文未討論的轉(zhuǎn)化研究，并已建立了九種不同的分化hESC產(chǎn)品方案用于細(xì)胞治療（圖1），每種方案均由NIFDC獨(dú)立驗(yàn)證。

2019年12月，國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì) (NHC) 和CFDA批準(zhǔn)了69項(xiàng)注冊(cè)的干細(xì)胞臨床研究/試驗(yàn)。其中，大多數(shù)基于hPSC的臨床試驗(yàn)（9項(xiàng)中的7項(xiàng)）由NSCRC進(jìn)行。其中包括三項(xiàng)使用中胚層衍生細(xì)胞類型（“M細(xì)胞”）針對(duì)三種適應(yīng)癥（卵巢早衰、子宮粘連和關(guān)節(jié)半月板軟骨衰竭）的臨床研究，三項(xiàng)使用視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞樣產(chǎn)品針對(duì)“干性”年齡相關(guān)性黃斑變性（AMD）或視網(wǎng)膜色素變性（NCT03944239）的臨床研究，以及一項(xiàng)針對(duì)帕金森病的研究（NCT03119636）。

所有這些研究均已獲得CFDA批準(zhǔn)，然后才在clinicaltrials.gov和WHO臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)庫中注冊(cè)。M細(xì)胞產(chǎn)品還被用于治療子宮粘連（NCT04232592），最近還在一些臨床試驗(yàn)中用于恢復(fù)COVID-19引起的嚴(yán)重肺部疾病病例的肺功能（NCT04331613）。轉(zhuǎn)化工作也在不斷取得進(jìn)展，以開發(fā)hESC衍生的肝細(xì)胞樣細(xì)胞，用于肝脂肪變性的臨床治療。

5、參與多能干細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化政策制定

國(guó)家干細(xì)胞資源中心在再生醫(yī)學(xué)和生物庫界的生物庫和其他生物加工標(biāo)準(zhǔn)的制定中發(fā)揮著非常積極的領(lǐng)導(dǎo)作用。在中國(guó)，國(guó)家干細(xì)胞資源中心積極參與干細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)工作組，該工作組在過去五年中在中國(guó)干細(xì)胞生物學(xué)會(huì)的主持下制定了三項(xiàng)中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。

其中第一項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)針對(duì)干細(xì)胞的采購(gòu)和一般使用，第二項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)針對(duì)hESC的技術(shù)要求、測(cè)試方法、測(cè)試規(guī)定、使用說明、標(biāo)簽、包裝、儲(chǔ)存和運(yùn)輸。

第三項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)針是對(duì)多能干細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)制定。2023年9月23日，第四屆中國(guó)干細(xì)胞與再生醫(yī)學(xué)協(xié)同創(chuàng)新平臺(tái)大會(huì)暨首屆金鳳干細(xì)胞論壇在重慶舉行，大會(huì)正式發(fā)布了我國(guó)首個(gè)人源干細(xì)胞國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《生物樣本庫多能干細(xì)胞管理技術(shù)規(guī)范》(GB/T42466-2023)。

第四屆中國(guó)干細(xì)胞與再生醫(yī)學(xué)協(xié)同創(chuàng)新平臺(tái)大會(huì)暨首屆金鳳干細(xì)胞論壇23日在重慶舉行，大會(huì)正式發(fā)布了我國(guó)首個(gè)人源干細(xì)胞國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《生物樣本庫多能干細(xì)胞管理技術(shù)規(guī)范》(GB/T42466-2023)。

這一國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)布，標(biāo)志著我國(guó)在干細(xì)胞樣本庫管理上有了標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)支撐，對(duì)于推動(dòng)我國(guó)干細(xì)胞研究和應(yīng)用的規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)展具有重要意義，也為干細(xì)胞領(lǐng)域后續(xù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的制定提供了先行示范。

國(guó)家干細(xì)胞研究中心前主任周琪教授大力推動(dòng)干細(xì)胞領(lǐng)域的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化，并推動(dòng)制定了兩項(xiàng)ISO標(biāo)準(zhǔn)，即多能干細(xì)胞生物庫標(biāo)準(zhǔn)（ISO/WD 24603: 2020 (E)）、小鼠和人類多能干細(xì)胞的建立、維護(hù)、特性描述和分配要求以及細(xì)胞培養(yǎng)中的微生物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)（ISO TC76 WG3標(biāo)準(zhǔn)正在制定中，即選擇檢測(cè)哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中微生物污染的方法的通用指南）。

他也是國(guó)際干細(xì)胞論壇 (ISCF) 的創(chuàng)始成員之一和現(xiàn)任主席，該論壇于2003年在英國(guó)醫(yī)學(xué)研究理事會(huì)的George Radda教授領(lǐng)導(dǎo)下成立，旨在資助只能通過國(guó)際協(xié)調(diào)才能進(jìn)行的合作。周教授還是ISCF支持的項(xiàng)目之一國(guó)際干細(xì)胞銀行計(jì)劃 (www.iscbi.org) 的指導(dǎo)小組成員。這項(xiàng)活動(dòng)協(xié)調(diào)了多能干細(xì)胞庫專家就提供高質(zhì)量細(xì)胞用于研究和臨床應(yīng)用的關(guān)鍵問題達(dá)成的共識(shí)。

6、科學(xué)合作與培訓(xùn)

NSCRC與眾多中國(guó)和國(guó)際研究團(tuán)體合作，NSCRC工作人員還參與了許多國(guó)際項(xiàng)目，包括與國(guó)際帕金森病項(xiàng)目G-Force合作（http://www.gforce-pd.com/）、為開發(fā)用于疾病建模的歐洲iPSC生物庫 (EBiSC) 提供咨詢（www.ebisc.org）并作為hPSCreg數(shù)據(jù)庫的合作伙伴參與hPSC的開發(fā)（www.hpscreg.eu）。

7、未來

2019年9月，NSCRC主任周琪教授組織成立了國(guó)家干細(xì)胞資源中心創(chuàng)新聯(lián)盟，該聯(lián)盟匯集了中國(guó)九個(gè)最重要的細(xì)胞和干細(xì)胞生物庫中心，旨在建立一個(gè)共享標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)卓越網(wǎng)絡(luò)，并為中國(guó)建立中央銀行資源。自動(dòng)化干細(xì)胞培養(yǎng)方面的國(guó)家合作也在開展中。

未來，除了與hPSCreg（www.hpscreg.eu）合作外，NSCRC還計(jì)劃為中國(guó)建立一個(gè)多能干細(xì)胞注冊(cè)中心，以便與hPScreg等其他注冊(cè)中心協(xié)調(diào)，促進(jìn)統(tǒng)一程序并促進(jìn)干細(xì)胞數(shù)據(jù)的國(guó)際交流。

中國(guó)一直積極主動(dòng)地投資干細(xì)胞研究和轉(zhuǎn)化研究，以促進(jìn)公共衛(wèi)生的重大利益，作為該計(jì)劃的一部分，NSCRC和IOZ-CAS期待繼續(xù)并進(jìn)一步為干細(xì)胞研究做出重大貢獻(xiàn)。

主要參考資料：Stacey GN, Hao J. Biobanking of human pluripotent stem cells in China. Cell Prolif. 2022; 55:e13180. doi:10.1111/cpr.13180

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